酶离者 高效高产慢病毒包装试剂盒 MJ110 降低门槛 简化流程

高效高产慢病毒包装试剂盒打破了慢病毒基因递送的技术壁垒，大幅提升慢病毒包装的效率及产量，为细胞基因治疗CRO和CDMO赋能。科研工作者只需要根据说明书进行“傻瓜式”操作即可高效便捷地包装出优质慢病毒，降低慢病毒的实验门槛，大幅简化实验流程、缩短实验周期。该产品旨在打造“平民化”包装优质慢病毒新时代，全面助力细胞基因治疗。

高效高产慢病毒包装试剂盒相较竞品，在滴度、效率和荧光等性能参数上均要优于市面上的其他品牌，产品参数达到国内国际先进水平。该产品使得慢病毒包装过程简易化仅需30分钟，Zui快1天即可包装出优质高滴度慢病毒，Zui快2天即可感染上靶细胞，Zui快4天即可筛选出感染效率达95%以上的稳转株，Zui快14天即可筛选出感染效率以上的单克隆稳转株。该试剂盒内核心工具、试剂均为自主研发，产品效果已得到众多高校、医院实验室的大量实验验证。

使用方法：

本试剂盒以1个10cm皿包装量（1T）为例。

Day0：细胞铺板

取对数生长期细胞状态佳的293T细胞（如要达到Zui佳包装效果需采购慢病毒包装专用驯化293T细胞，货号MJ109），按8-10×106个/皿的细胞数量接种至10cm培养皿中，添加DMEM完全培养基至8-10ml，充分铺匀，37℃培养箱过夜培养。293T细胞状态对包装病毒滴度影响较大，需确保293T细胞状态良好且传代代数较少才可获得高滴度病毒。

Day1：慢病毒包装

首次使用试剂盒，需用GFP positive ctl C（阳性对照C）质粒进行病毒包装来检验自备293T是否适合病毒包装（如包装的病毒上清感染细胞没有或者较少绿色荧光说明自备293T细胞不适合包装病毒，建议购买佐润配套的293T细胞）。包装前先将试剂盒内Hi-EFF LentiTM mix A（试剂A）、Hi-YLD LentiTM mix B（试剂B）、GFP positive ctl C（阳性对照C）和无血清、无双抗opti-MEM培养基（或者DMEM培养基）恢复至室温：

1．当细胞密度达到80-90%时，提前30min换液（换完全培养基，加不加双抗都无影响）；

2．取1mL无血清、无双抗的培养基置于EP管中，先加入40μL Hi-EFF LentiTM mix A（A使用前需震荡充分或者手动上下颠倒混匀），再加入40μL Hi-YLD LentiTM mix B，加入8μg目的质粒或40μL GFP positive ctl C（阳性对照C）质粒，Zui后将以上混合液用力上下颠倒混匀10s左右，37℃培养箱静置30min（静置过程勿摇晃）；

3．将上述静置后混合液缓慢上下颠倒混匀，用移液枪逐滴缓慢加入提前换过液的培养皿中，十字交叉法轻柔混匀，37℃培养箱培养。

Day2：收集24h病毒上清

包装后24h，将培养上清收集至离心管中并4℃保存，小心加入新鲜培养基8-10mL。

Day3：收集48h病毒上清

包装后48h，将培养上清收集至离心管中（可根据情况继续收集72h上清）。

Day4：病毒上清初步纯化

将收集的病毒上清离心，3000rpm／min，4℃，离心10min，取上清，用0.45μm无菌滤器过滤，得到病毒上清原液，可直接进行细胞感染，也可分装后-80℃保存。

Day5：病毒感染目的细胞

通常情况下包装病毒后24h和48h是病毒出毒高峰期，如追求效率，收集24h病毒上清后即可进行病毒上清纯化并直接进行目的细胞感染。根据经验可在6孔板或3.5cm皿目的细胞密度达到50%左右时加入0.5-2ml病毒上清进行感染，如感染效率较低可弃掉一半细胞继续进行二次或者三次感染并加入终浓度为5μg／mL的Polybrene（感染增强剂聚凝胺）直至感染成功。

Day6：稳转株筛选

以GFP positive ctl C（阳性对照C）包装病毒感染目的细胞筛选为例：上清感染目的细胞24h后只要看到绿色荧光或者48h达到50%以上绿色荧光即可添加Puromycin（表达筛选剂嘌呤霉素）进行筛选，常规细胞推荐筛选终浓度为2.5μg／mL左右，实际筛选浓度以不感染病毒的空白细胞全部死亡为准。

注意事项：

本产品仅供科研使用。包装慢病毒及感染细胞建议在生物安全柜中进行操作。